Mezzosopranistka Štěpánka Pučálková absolvovala štúdium odboru Opera na Universität Mozarteum v Salzburgu pod vedením profesorov Elisabeth Wilke, Josefa Wallniga a Eike Gramssa. Za vynikajúce študijné výsledky ju organizácia Stiftung Mozarteum vyznamenala Medailou Lilli Lehmannovej.

Mladá interpretka sa predstavila v celom rade operných produkcií salzburskej Univerzity Mozarteum, ale tiež v Landestheater Salzburg: Idamante (Mozart, Idomeneo), Druhá dáma (Mozart, Čarovná flauta), Marcellina (Mozart, Figarova svadba), Octavian (Strauss, Ružový gavalier), Larina (Čajkovskij, Eugen Onegin), Galatea (Händel, Acis a Galatea), Annina (Verdi, La traviata), či Mercedes (Bizet, Carmen). V roku 2009 účinkovala v rámci projektu Gut Immling v Katare ako Druhá dáma v inscenácii Čarovnej flauty. V rámci Salzburger Festspiele sa v lete 2013 predstavila ako Lehrbube (Wagner, Majstri speváci norimberskí) pod taktovkou Daniela Gattiho a v réžii Stefana Herheima. V marci 2014 v Salzburgu vystúpila ako Sesto (Mozart, La clemenza di Tito) – a v tej istej úlohe a inscenácii tiež v roku 2014 v Teatro Romano Fiesole vo Florencii.

Na jeseň 2014 debutovala v Štátnej opere Praha ako Páža Herodiady (Strauss, Salome), v Slovenskom národnom divadle ako Rosina v Rossiniho Barbierovi zo Sevilly a Annius v Mozartovej opere La clemenza di Tito. V úlohe Mercedes debutovala v Landestheater Bregenz a v Landestheater Salzburg.

V roku 2015 sa stala finalistkou medzinárodnej speváckej súťaže Hans Gabor Belvedere Competition.

V sezóne 2015/2016 vystúpila ako Siegrune (Wagner, Valkýra) na prestížnom päťdesiatom salzburskom festivale Osterfestspiele. Vystupovala tiež na zájazde Štátnej opery Praha v Japonsku ako Tretia dáma (Čarovná flauta). Svoj repertoár v tomto súbore rozšírila o tituly Madama Butterfly (Puccini) a Romeo a Júlia (Gounod).

Koncom roku 2016 sa Štěpánka Pučálková zúčastnila medzinárodnej speváckej súťaže Concours international de belcanto Vincenzo Bellini v Marseille, kde získala druhú cenu v kategórii Najlepší ženský hlas.

V sezóne 2017/2018 vystúpila opäť ako Siegrune na turné v čínskom Pekingu, v Národnom divadle Praha debutuje v úlohe Charlotte (Massenet, Werther) v koprodukčnom projekte s Frankfurter Oper. Koncertuje v Nórsku, Taliansku, Rakúsku a Českej republike.

V januári 2019 vystúpila pod taktovkou maestra Plácida Dominga na koncerte Národného divadla v Prahe s názvom “Mozartove narodeniny” a predstavila sa na festivale Mozartwoche 2019 v Salzburgu, riaditeľom ktorého se stal Rolando Villazón, v sólovom parte Mozartovej „Davide messe penitente“.

Štěpánka Pučálková je od sezóny 2018/2019 sólistkou a členkou ansámblu Semperoper v Drážďanoch.

Štěpánka Pučálková sa intenzívne venuje koncertnej činnosti s Karlovarským symfonickým orchestrom, Brnianskou filharmóniou, ale aj s Mozarteum Orchester Salzburg či Konzertgesellschaft Salzburg. Z oratoriálnej tvorby interpretuje Requiem, Stabat Mater (Dvořák), Omšu c moll a Requiem (Mozart), Rossiniho Petitte messe solenelle a ďalšie diela.

Spolupracovala s významnými dirigentmi a režisérmi: Christian Thielemann, Daniele Gatti, Vera Nemirova, Stefan Herheim, Mariusz Treliński, Mirga Gražinytė-Tyla, Friedrich Haider, Marco Guidarini, Peter Valentovič, Jiří Heřman, Leo Hussain, Eike Gramms, Martin Lebel, Leoš Svárovský, Rastislav Štúr, Martin Leginus, Keith Warner a ďalší.